(1) 高増殖性と高ウイルスベクター生産性を有する国産のヒト組織由来オリジナル宿主細胞(HAT細胞)の開発(川崎集中研)

　MAB組合の細胞開発拠点である川崎集中研/ちとせ研究所及び成育医療研究センターにて、ウイルスベクター生産に適した国産の新規ヒト由来宿主細胞を開発しました。成育医療研究センターから提供されたヒト由来組織を用いて細胞分離及び不死化細胞株の作製を行い、HEK293細胞と同等以上の増殖性とウイルスベクター生産性を有するHAT細胞（Human Amniotic epithelial cell line for gene & cell Therapy：HAT細胞と命名）の樹立に成功しました。これまでに、特性及び機能解析を行うとともに、クローン化により単一細胞由来となる細胞株（HAT A2C1細胞）を構築済みです。HAT A2C1細胞は、 HEK293細胞に比べ高増殖性及び高AAVウイルスベクター生産性を有しており、遺伝子治療用ウイルスベクター製造への応用が期待されています。HAT A2C1細胞は一定の条件のもと、希望者に提供可能です。本開発は、日本政府の「人を対象とする生命科学・医学系研究に関する倫理指針」に基づいて行われました。

(A)(B) HAT細胞のクローン株（HAT_A2C1）と、HEK293細胞の派生株（VPCs 2,0, Gibco）の増殖性およびゲノム力価の比較。

HAT_A2C1は、HEK293を上回る増殖性と生産性を示した。125mLフラスコを用いた無血清浮遊培養条件下で、AAVベクターはトリプルトランスフェクションにて作製した。AAV2およびAAV5のゲノム力価はqPCRにて定量した。

(2) ウイルスベクター製造のための各種要素技術開発と統合プラットフォーム構築 (草津集中研)

　本研究開発事業に参加した各研究機関において、ウイルスベクターの製造プロセスに関する要素技術の検討が行われ、シード培養、拡大培養、プラスミドトランスフェクション後の生産培養、細胞可溶化液の清澄化、アフィニティ、ポリッシングなどの精製の各工程において新規技術や新製品の開発が進められました。本事業で開発した代表的な要素技術として、国産の培養リアクターを用いた培養プロセス（ZACROS）、細胞可溶化液の清澄化工程における前処理剤（カネカ）とろ過フィルター（東レ）、精製工程における完全粒子/空粒子の分離のためのイオン交換クロマト担体と精製プロセス（JNC、ワイエムシィ）、ゾーナル超遠心による精製技術（東京大学）等があります。

　開発した一連の要素技術を製造技術開発拠点である草津集中研に集約し、50Lスケールの培養液から完全粒子の精製までのAAVウイルスベクターの製造プロセス（統合プラットフォーム）構築を行いました。得られた完全粒子について、ゲノムタイター、完全粒子比率、カプシド等の分析等の評価を行った結果、高品質なAAVが高収率で製造できることが実証されました。